1、器件  

  牛肉膏蛋白胨培育基，培育皿（6套一包），手提式高壓蒸汽菌鍋等。  

2、操作過程  

  1．shou先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)參加適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。  

  2．放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，避免防礙蒸汽流轉(zhuǎn)而影響滅菌作用。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，避免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。  

  3．加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的辦法一起旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。  

  4．用電爐或煤氣加熱，并一起翻開排氣閥，使水歡騰以掃除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣徹底排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力添加而逐步上升。當鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，操控熱源，保持壓力**所需時刻。本試驗用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分鐘滅菌。  

  5．滅菌所需時刻到后，堵截電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度天然下降，當壓力表的壓力降**0時，翻開排氣閥，旋松螺栓，翻開蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時，翻開排氣閥，就會因鍋內(nèi)壓力俄然下降，使容器內(nèi)的培育基由于表里壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，構(gòu)成棉塞感染培育基而發(fā)作污染。  

  6．將取出的滅菌培育基放入 37℃溫箱培育24小時，經(jīng)查看若無雜菌成長，即可待用。  

稀釋倒平板法  

  先將待分離的資料用無菌水作一系列的稀釋（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然后分別取不同稀釋液少量，與已溶化并冷卻** 45 ℃左右的瓊脂培育基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培育皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培育必定時刻即可出出菌落。如果稀釋妥當，在平板外表或瓊脂培育基中就可呈現(xiàn)渙散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁衍構(gòu)成的。隨后挑取該單個菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培育。倒平板的兩種辦法 持皿法 

  ⑴將若干無菌培育皿疊放在左側(cè)，便于拿取。  

  ⑵點著煤氣燈，將火焰調(diào)到適中（空氣不要太大，避免氣流過急）。  

  ⑶倒平板時，先用左手抓住三角瓶的底部，傾斜三角瓶，用右手旋松棉塞，然后用右手的小指和手掌邊際夾住棉塞并將它拔出（切勿將棉塞放在桌面上），隨之將瓶口周緣在火焰上過一下（不行灼燒，以防爆裂，以殺死可指沾在瓶口外的雜菌。然后將三角瓶從左手傳**右手中（用右手的拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部），在這操作過程中瓶口應(yīng)保持在離火焰2~3處，瓶口始終向著火焰。左手拿起一套培育皿，用中指、無名指和小指托住培育皿底部，用食指和大拇指夾住皿蓋并敞開一縫，剛好能讓三角瓶伸入，隨后倒出培育基。一般約倒入12ml的培育基即可鋪滿整個皿底。蓋上皿蓋，置水平方位等凝。然后再將三角瓶移**左手，瓶口再次過火并塞緊棉塞。    平板培育基的冷凝辦法有兩種，一種是將平板一個個攤開在桌面上冷凝，另一辦法是將幾個平板疊在一起冷凝。前者冷凝速度較快，在室溫較高時選用；而后者冷凝速度較慢，可在室溫較低時選用，其長處是構(gòu)成冷凝水少，特別適用于平板劃線等的需求。  

疊皿法 

  此法過程與持皿法根本相同。不同點是左手不用持培育皿，而是將培育皿疊放在煤氣燈的左側(cè)并接近火焰，用右手拿住三角瓶的底部，左手的掌背對著瓶口，用小指與無名指夾住瓶塞，將其拔出，隨即使瓶口過火，一起用左手敞開**上面的皿蓋，倒入培育基，蓋上皿蓋即移**水平方位待凝。再順次倒下面的平板。在操作過程中，瓶口應(yīng)向著火焰保持傾斜狀，以防空氣中微生物的污染